تست مایکوپلاسما به روش PCR و ریل تایم PCR

مایکوپلاسما یکی از آلاینده های پر چالش در حوزه بیولوژیک است که در آزمایشگاه های کشت سلول، شرکت های تولید کننده فراورده بیولوژیک و صنایع غذایی و دارویی به عنوان یکی از چالش های همیشگی به شمار میرود.

به دلیل مشکلاتی که این ارگانیسم های کوچک به وجود می آورند و عدم امکان تشخیص این ارگانیسم ها در تست هایی مانند استریلیتی، ارزیابی حضور مایکوپلاسما در ترکیبات مختلف، با روش های مولکولی مانند PCR و ریل تایم PCR انجام میشود

شرکت آرک زیست آزما به عنوان آزمایشگاه کنترل کیفی فراورده های بیولوژیک، یکی از آزمایشگاه های مرجع برای انجام تست مایکوپلاسما در حوزه فراورده های بیولوژیک است که این تست را به روش های PCR و روش ریل تایم PCR ارائه میکند.

یکی از چالش های تست مایکوپلاسما، طراحی پرایمر و پروب هایی است که به صورت اختصاصی بتواند گونه های مختلف مایکوپلاسما را تشخیص دهد. مهمترین بخش و چالشی ترین بخش این کار ارائه پرایمری است که بتواند تمام گونه های مایکوپلاسما را تشخیص دهد و در عین حال به گونه های متفرقه مایکوپلاسما متصل نشود.

 

برای این منظور روش های مختلفی به کار گرفته میشود از جمله استفاده از پرایمر های دژنره، استفاده از میکس پرایمرها و روش هایی مانند Nested PCR و روش هایی مثل TouchDown PCR که همه روش ها دارای مزایا و معایب خود هستند

به نظر میرسد در بین تمام روش ها استفاده از روش ریل تایم PCR و پروب های Tag man یکی از استانداردترین و قابل اعتماد ترین روش ها برای انجام تست مایکوپلاسما باشد که این روش امکان کمی سازی ارزیابی مقدار مایکوپلاسما در نمونه نیز فراهم میشود.

برای تهیه کیت سنجش مایکوپلاسما به روش Realtime PCR بر پایه پروب میتوانید با شماره ما تماس حاصل کنید.

مایکوپلاسما به عنوان یکی از کوچک‌ترین باکتری‌های شناخته‌شده، چالش‌های منحصربه‌فردی در تشخیص و ارزیابی ایجاد می‌کند، به ویژه در روش‌های مولکولی مانند PCR. این باکتری فاقد دیواره سلولی است که آن را در برابر برخی آنتی‌بیوتیک‌ها مقاوم می‌سازد و همچنین باعث می‌شود در فرآیندهای فیلتراسیون آزمایشگاهی (مانند فیلترهای ۰.۱ تا ۰.۴۵ میکرومتری) به راحتی عبور کند و منجر به آلودگی‌های ناخواسته شود. ارزیابی مایکوپلاسما در نمونه‌های مختلف مانند خلط تنفسی، ادرار، سواب‌های تناسلی یا حتی کشت‌های سلولی، نیاز به دقت بالا دارد، زیرا این باکتری می‌تواند به سرعت در محیط‌های آزمایشگاهی تکثیر شود و نتایج را تحت تأثیر قرار دهد.

 

یکی از اصلی‌ترین چالش‌ها در ارزیابی مایکوپلاسما، لزوم دقت بالا در استخراج DNA است. فرآیند استخراج DNA باید به گونه‌ای باشد که حتی مقادیر کم DNA باکتری را از دست ندهد، زیرا مایکوپلاسما اغلب در غلظت‌های پایین وجود دارد و روش‌های سنتی مانند کشت باکتریایی کند و غیرقابل اعتماد هستند. در نمونه‌های پیچیده مانند کشت‌های سلولی یا بافت‌های حاوی پروتئین بالا و debris سلولی، مهارکننده‌ها می‌توانند واکنش PCR را مختل کنند و منجر به نتایج کاذب منفی شوند. بنابراین، کیفیت بالای استخراج DNA ضروری است؛ این شامل استفاده از کیت‌های استخراج پیشرفته، کنترل کیفیت دقیق (مانند بررسی عدم آلودگی DNA خارجی) و اطمینان از حذف مهارکننده‌ها می‌شود تا حساسیت و دقت تست حفظ گردد.